了解冬虫夏草
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冬虫夏草含量的测定方法研究
发布时间:2015-12-31
摘要:亚香棒虫草性状与冬虫夏草十分相似,仅从性状上区分不易,建议既要考虑核苷类物质,又要考虑甘露醇、多糖等活性物质。
        亚香棒虫草性状与冬虫夏草十分相似,仅从性状上区分不易,建议既要考虑核苷类物质,又要考虑甘露醇、多糖等活性物质。
        核苷类物质:高效液相色谱(hplc)法:核苷类物质的hplc法一般采用c18色谱长柱,检测波长为260nm。研究者以0.01mol/l磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(ph=6.5)-甲醇(85:15)为流动相,结果腺苷与前一样品峰可达到完全分离,分离度2.41,保留时间9.9min。采用[0.01mol/l nah2po4~0.01mol/l nah2po4(1:2.2)]-甲醇(17:3)为流动相,结果鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤、腺苷和虫草素等五种冬虫夏草主要核苷均能达到完全分离,且峰形好。采用hplc法分析了13个产地的冬虫夏草主要有效成分腺苷含量,结果理论塔板数对照品峰计算不低于2000,样品分离良好。根据冬虫夏草苷类成分hplc指纹图谱的研究结果,发现在选定色谱条件下,尿苷的色谱通常与腺苷的峰面积积分相当,且在各色谱峰中的峰面积积分最大,并依此法测定14批不同产地冬虫夏草药材中腺苷和尿苷的含量。
        高效液相色谱与电喷雾质谱联用(hplc-esi-ms)法:首次报道了采用hplc-esi-ms法测定天然和人工冬虫夏草中腺苷和虫草素的含量,为冬虫夏草的质量评价提供了一种快捷、有效的检测方法。采用hplc-esi-ms法,以90%甲醇为提取溶剂,采用多发应检测(mrm)模式测定冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的含量。选择性例子检测(sim)和电喷雾离子化(esi),以水-甲醇-甲酸(90.0:9.0:1.0,v/v)为流动相,在shimadzu vp-ods色谱柱上分离,以2-氯腺苷为内标,建立了定量分析冬虫夏草和蚕蛹虫草中尿苷和腺苷的等度lc/esi-ms法。该方法简单、灵敏度高且重视性好,可用于测定各种天然冬虫夏草及其代用品中的核苷类活性物质。
        研究者还以0.05mol/l磷酸氢二钠植被的硅胶gf254 薄层板,用氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-水(8:2:6:0.4:0.8:)混合溶剂10ml中加浓氨水2滴为展开剂,测定波长260nm,参比波长400nm,并与紫外分光光度法比较,两法测得结果一致。
        甘露醇:研究者采用容量法测定了冬虫夏草甘露醇含量,水提取法测得量大大高于醇提取法,并优化样品预处理过程为在80℃水浴在北方、用蒸馏水浸提30min。结果表面,虫草甘露醇含量受物种多样性和微生态环境的影响,超过了大的地域气候的影响。
        采用比色法测定了冬虫夏草中甘露醇的含量。由于比色法测定的结果可排除样品中其他还原性物质的干扰,其结果较容量法更能代表甘露醇的实际值,故比色法测定结果要比容量法可靠,且方法饿更快速简便。
        根据甘露醇能被高碘酸氧化,以联苯胺作显色剂时能在蓝色背景下出现白色斑点的原理,对冬虫夏草中的d-甘露醇经薄层分离显色后,在为295nm及370nm的条件下进行双波长发射锯齿形扫描,测得西藏冬虫夏草中d-甘露醇的含量为8.4%,回收率为98.0%~101.6%。
        多糖:采用硫酸-蒽酮比色法于波长(624±1)nm处测定了青岛产冬虫夏草于山西产亚香棒虫草中多糖的含量,结果温度、湿度、硫酸浓度是影响结果的中药因素,以室温20℃,相对湿度低于42℃、98%浓硫酸及供试液于浓硫酸比为1:3时,效果好。亚香棒虫草中多糖含量低于冬虫夏草中多糖含量。
 
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